Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的现实生活中逐渐扩展

从第一次注意到呼吸道自身免疫反应到注意到1改进型高血压病理病症的方面率在儿童时期就有不错的阐述，多个呼吸道自身免疫反应阴性的儿童中会有70%在胰岛素转换后10年内患上高血压，而随访15年的儿童这一比例提高到84%。来得之下，占病理1改进型高血压一半以上的改进型1改进型高血压的发病的系统还无法得不到充分的数据分析。

越来越多的人开始适用分期系统来定义1改进型高血压的方面：个体在注意到多种呼吸道自身免疫反应时离开第1阶段性，注意到血糖反常时离开第2阶段性，注意到病症时离开第3阶段性。一些多发呼吸道自身免疫反应阴性的个体，在1期和2期，方面较快，并发展为发病的1改进型高血压。我们在此之后阐述了三组成员在首次监测到多种呼吸道自身免疫反应取样后大概10年无高血压的太快方面者，这组成员病症数目少，但特性非常指明。随后，我们辨认出呼吸道自身抗原基因表达CD8+T细胞会底物在方面缓快的病症中会基本不存在，但在近期发病和与此相关的高血压病症中会很容易监测到。这不太可能表明，与方面病症来得，这些病症自身免疫底物的调节减快。

早期数据分析表明，尽管调节性T细胞会(Treg)数量经常性，但高血压病症存在一些新功能瑕疵，其中会包含对IL-2的底物技能减缓。此外，高血压病症中会的波动CD4+T细胞会不太可能对调节想像中富抵抗性，观感为波动T细胞会的选择性消退，大自然产生的Treg和体外产生的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T细胞会中会IL-2底物消退。本数据分析的目的是阐述了CD4+调节性T细胞会(Treg)在大群想像中缓快方面者中会的特性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

步骤：BOX数据分析是一项以人群为了将的纵向数据分析，在21岁以下确诊的病症亲属中会检查1改进型高血压的危险因素。我们在此之后阐述了长期缓快方面者的特性，他们保持稳定多重呼吸道自身免疫反应阴性超过10年，但无法注意到高血压的病理病症，快性或非顺利变性自身免疫。随后，10名继续保持稳定无高血压并愿意提供大量胰岛素取样的缓快方面者纳入T和B细胞会新功能数据分析。在目前的数据分析中会，8名快方面者(SP组成员)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的呼吸道自身免疫反应阴性。所有的旁观者都始终保持稳定1改进型高血压方面的1期，尽管一些人随后失掉了呼吸道自身免疫反应对某些抗原的阴性底物，然而，一名病症已经始终保持稳定2期大概6年，但无法注意到病理病症，一名病症被病症为高血压，该患者72岁，在挖掘实验取样时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析中会对该酪氨酸顺利进行了单独数据分析。转化外周血单个反应器细胞会(PBMCs)，采用多参数流式细胞会妖术和T细胞会选择性试验中数据分析酪氨酸中会Treg的增益、表改进型和新功能。适用FlowSOM和CITRUS(聚类反应器对、表征和回归)顺利进行无监督聚类数据分析，数据分析Treg表改进型。

结果：与健康酪氨酸来得，来自快方面体的潜意识CD4+T细胞会的监督聚类辨识，介导的潜意识CD4+ Treg增益提高，与糖皮质激素诱导的TNFR相关细胞内(GITR)隐含提高有关。一名HbA1c增大的病症与方面缓快者和匹配的大鼠成员来得，Treg谱有所不同。新功能最近，与健康酪氨酸来得，来自缓快方面体的Treg依赖性的CD4+波动T细胞会选择性明显受损。观感为对波动CD4+T细胞会CD25和CD134隐含的选择性提高。

左图1 集中的表改进型数据分析辨识，CD4+Treg亚改进型在快方面缓冲区中会提高。由FlowSOM作用于的Treg室，汇聚在来自所有酪氨酸的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据标上物隐含反应器对出10个元簇:潜意识T细胞会_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T细胞会;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)适用9个不同Treg标上作用于的10个元簇的MST。每个端口代表一个坦克部队(100个坦克部队)，更大的元坦克部队(10个元坦克部队)在端口组成员外围上色。每个端口中会的饼左图透露单个标上的隐含高级别。(b)每个元聚类的热左图，以辨识整体标上隐含。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)作用于左图，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比丰度为每个metacluster箱内两条路相左图(丰度> 0.05%)已确定为HD和SP组成员:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T细胞会(l)。深黄色带子代表这些年来SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对标记秩检验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 适用CITRUS的预测模改进型证实，Treg增益的提高是方面缓快的logo。分级制度门控(a - f)和柑橘数据分析(g-k)相当SP旁观者和匹配的HD旁观者在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会群体的权威性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3硫化物，然后通过HLA-DR和GITR隐含顺利进行转化，模拟FlowSOM社会群体。(b) HD(黑点)和SP(布氏)组成员以及酪氨酸SP 606(深黄色)中会CD25+ cd127的增益汇总左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控开集的箱内两条路相左图;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度左图例，箭头值得注意的簇被标识为SP和HD缓冲区错综复杂的不同。(j)箱内两条路相左图辨识了在SP(布氏)和HD(灰点)组成员中会，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相比丰度(比例)。(k)左图表辨识每个簇的表改进型(粉色)和Treg标上相比隐含与背景隐含(黄色);上列，磁盘Treg_3;后面一行，磁盘Treg_4。背景与所有其他簇中会标上的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对标记秩检验

左图3 与健康献血者来得，方面缓快者潜意识treg的GITR提高。每个潜意识CD4+T细胞会元簇(潜意识T细胞会_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T细胞会;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个隐含标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的隐含热左图(sp606不包含在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇中会所有HD(黄褐色)、所有SP(黄色)和SP 606(深黄色)的FlowSOM GITR隐含相联，辨识左图表(c)和汇总左图(d)。Wilcoxon配对标记秩和检验，p< 0.07(深黄色)所有酪氨酸包含，p< 0.05(黄色)酪氨酸SP 606和匹配的HD不包含在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR隐含，从分级制度门控，从所有HD(黄褐色)、所有SP(黄色)和SP 606(深黄色)相联，辨识左图表(e)和汇总左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对标记秩检验

左图4 来自缓快方面的CD4+ treg细胞会压制波动CD4+T细胞会的技能减缓。SP组成员用黄色的两条路线和带子透露，HD组成员用黄褐色的两条路线和带子透露，深黄色的两条路线/带子透露酪氨酸sp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会顺利进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被标上为CFSE, Treg按注意到的比例滴定。用抗CD3 /28微珠再造细胞会，培养出来3天后顺利进行流式细胞会妖术监测。(a-d)与CD4+接收者者相比应的treg培养出来(诱导)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培养出来。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE选择性百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性百分比。适用阴性对照(介导的响应细胞会包含treg)量度选择性百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

左图5 波动CD4+T细胞会对缓快方面的T细胞会再造的选择性更敏感。SP组成员用黄色的两条路线和带子透露，HD组成员用黄褐色的两条路线和带子透露，深黄色的两条路线/带子透露酪氨酸sp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会顺利进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel标上，treg按注意到的比例滴定。用抗CD3 /28微珠再造细胞会，培养出来3天后顺利进行流式细胞会妖术(CD25反染)和细胞会因子数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同培养出来。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE选择性百分率(b)。(c,d) CD25选择性百分率(c)和CD134选择性百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在五小出来中会的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

结论：我们量度出来的结论是，来自缓快方面子的再造潜意识CD4+Treg在GITR隐含中会得不到了扩展和丰富，强调了实质性数据分析Treg在1改进型高血压危险性个体中会的异质性的合理性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28